美国Bio-Rad Trans-Blot SD型半干转印系统操作使用说明
美国Bio-Rad Trans-Blot SD型半干转印系统操作使用说明 | 时间: February-24 21:42:00 | 分类:技术栏目
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美国Bio-Rad公司的Trans-Blot SD型半干转印系统是在电场的作用下把聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶上的蛋白或核酸条带转移到硝酸纤维素膜上，其运用了电泳检测的方法，使得蛋白或核酸从凝胶中进行分离转移到硝酸纤维素膜上，由于硝酸纤维素膜的可支撑性，使得蛋白或核酸条带能够在电泳后继续做杂交等后续检测的实验，是一种普通，简单，快速的转印方法。该系统无需缓冲液池或凝胶盒，可达到快速、有效、经济的转印目的。平板电极提供一致可靠的转移，可转移多块凝胶，安装快速方便。
二.用途：
主要应用于分子生物学实验，定量和定性分析基因表达，和特定蛋白质表达，用于相关的Northern杂交、Southern杂交和Western杂交分析方法，可在10-35分钟内完成。
半干转印槽和 PowerPac通用电泳仪
三.使用：
准备缓冲液、凝胶
1．根据凝胶平衡、三明治装置、电泳过程等所需要的缓冲液用量准备足够的缓冲液。
2．使用去离子水浸润凝胶，并在转印缓冲液中平衡15min。
所用凝胶须在缓冲液中平衡，除去电泳过程中所带的盐分；在转印过程中，这些盐会引起转印缓冲液导电性升高，产生大量的焦耳热。不同浓度的凝胶和不同的缓冲液组分，会引起凝胶的收缩和膨胀，因此平衡过程可以使凝胶调整到电转印前较好的尺寸大小。当电泳缓冲液和转印缓冲液组分相同时，可不进行平衡过程（如，非变性凝胶）。将凝胶、印记膜夹放在两层滤纸中间形成三明治结构。
如果使用超厚滤纸，每侧则只需要1张;如果使用超厚或薄的滤纸，每侧则需要2－3张。
半干转印系统中，滤纸起到存储电转印缓冲液的作用，因此用量的多少非常重要。为避免污染，请佩戴手套接触凝胶、印记膜和滤纸。
3．相对于每一张凝胶，需要按尺寸裁减出一张印记膜、两到六张滤纸。Bio-Rad公司提供了预切膜和滤纸。
4．在电转印缓冲液中润湿滤纸。
5．将印记膜放入电转印缓冲液中平衡。组装三明治结构前，膜必须全部浸润。硝酸纤维素膜可直接在转印缓冲液中平衡；首先PVDF膜需要100％甲醇浸润后，再在缓冲液中平衡。
6．小心打开安全盖，取下阴极装置。
7．将预先润湿的超厚滤纸平房在阳极板上，用滚筒驱赶气泡。如果使用厚或薄的滤纸，则叠加2－3张湿润的滤纸，并驱赶气泡。
8．将预先浸润的印记膜小心放在滤纸上，驱赶气泡。
9．将平衡后的凝胶放在印记膜上，将凝胶放在印记膜中央，如果凝胶超出印记膜外有所偏离，将不能达到全部转印，要裁剪同样尺寸的印记膜和滤纸。
放置后尽量不要移动转印膜，以防止产生玷污印记和人为印迹。用滚筒驱赶气泡，使凝胶和印记膜完全接触。
10．在凝胶上方放入另外一块润湿后的超厚滤纸；如果使用厚或薄的滤纸，则叠放2－3张润湿后的滤纸，并驱赶气泡。擦干凝胶/印迹膜三明治结构外过量的缓冲液，以防止电流泄漏。
11．小心盖上阴极盖。
12．加盖装置的安全盖。
转印过程
13．接通电源，设置电泳仪参数，Mini-凝胶：10-15V/5.5mA/cm2, 10-30min；
大凝胶：15-25 V/5.5mA/cm2, 30-60min，开始转印过程。
14．转印结束后关闭电源，取下转印夹，拆卸凝胶三明治装配，用ddH2O清洗印记膜，确保膜上无剩余凝胶和样品，之后进行样品检测、成像。
