做电泳跑page、提取质粒、做WESTERN BLOT时注意点

做电泳跑page、提取质粒、做WESTERN BLOT时注意点 | 时间: May-7 13:46:55 | 分类:技术栏目

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做电泳时注意容易出问题，以下问题要注意

1. 跑page胶的时候

小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些，且分离效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分离。

2. 提取质粒的时候

较后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一点时间，较好是空调吹热风，或是37度温箱放长一点的时间，我试过室温过夜，酶切很好。

3. 做WESTERN BLOT 的时候

大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，保存起来，用的时候取出一块，没有任何影响。这对于摸索条件的战友来说，节约了大量的时间。