化学发光凝胶成像系统简介
化学发光凝胶成像系统简介 | 时间: November-5 10:56:05 | 分类:技术栏目
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一、化学发光成像的基本原理
化学发光（Chemiluminescense）是A、B两种物质发生化学反应生成C物质，反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*，处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。因化学反应过程中伴随光辐射现象，故称为化学发光。在生物学领域常被用来检测蛋白质与DNA，反应过程中不需要紫外光等激发光源，是依靠HRP或AP等特定的酶与底物结合而推进反应的发生。通常产生的光辐射非常微弱，光信号不易采集。
二、特点
灵敏度高，数据结果可用于定量分析；
1 不需要暗房、压片；
2 自动完成曝光，关键条带不会因为曝光不足或者曝光过度而丢失；
3 无需耗材；
4 图片结果为电子文档，方便数据分析、存档和长期保存；
与传统胶片法的比较，化学发光法具有：
三、技术参数要求
成像系统一般以CCD相机、暗室和软件为主要组成部分。CCD是电荷耦合器件（Charge Coupled Device）的英文名称缩写，是一种光电转换器件，是成像系统的核心部件。化学发光产生的光信号非常微弱，所以对化学发光成像系统的CCD性能要求比较高。衡量CCD好坏的指标，有分辨率，CCD尺寸，动态范围，灵敏度，量子效率，信噪比等，其中像素数以及CCD尺寸是重要的指标。CCD感光器件的面积越大，即CCD面积越大，捕获的光子越多，感光性能越好，信噪比越低。但是高像素不一定是好的CCD，其原因就是像素大小（Pixel Size），相同数目的像素，排列越密集，像素之间就越容易出现电流干扰，容易出现"噪点"等干扰成像质量的现象出现。事实证明，像素大小在7~10um2为合适。
化学发光还需要进行一段反应时间的积累才能获得佳曝光结果。而在曝光超过5-10秒时，CCD芯片就会发热，如果没有致冷设备的芯片，“热”或者白的像素点就会遮盖图像，图像到处可见雪花。CCD结构设计、数字化的方法等都会影响噪音的产生。当然通过改善结构、优化方法，同样能减少噪音的产生。例如，VILBER公司推出的SenSo View技术就是一种在成像前消除背景噪音的技术。
四、应用举例
化学发光成像系统可用于ECL、ECL PLUS、Southern、CDP Star、CSPD、Northern和Western杂交的化学发光等各种化学发光曝光后的样品检测。也可用于用荧光素酶(luciferase)基因标记细胞或DNA的生物发光检测。如果配备紫外、红、绿、蓝等激发光源，还可以进行多色荧光，实现同时检测两种以上的目标蛋白。
